(رسالة دكتوراه للطالب عاصم خضر الباكير) دراسة تأثير استخدام العاثيات الجرثومية في جراثيم الإشريكية القولونية المسببة لإسهال العجول وفي صحة حيوانات التجارب

ملخص البحث:

هدفت هذه الدراسة لعزل جراثيم الإشريكية القولونية الممرضة من حالات الإسهال عند العجول في محافظة حماة، ومحاولة توظيف عاثيات الجراثيم المعزولة من البيئة المحيطة في علاج حالات الاسهال المسببة بهذه الجراثيم، إذ أجريت هذه الدراسة في مخابر كلية الطب البيطري التابعة لجامعة حماة في الفترة الواقعة ما بين 2/4/ 2024 و 15/11/2025 وأجريت الدراسة على خمس مراحل:
المرحلة الأولى:
تم جمع عينات الدراسة من العجول المصابة بالإسهال كمسحات شرجية حيث بلغ تعدادها 60 مسحة، وتم زراعة الجراثيم على المنابت التمييزية والانتقائية ماكونكي و EMB، وتم إجراء الاختبارات الكيمياحيوية لتشخيص جراثيم الإشريكية القولونية باستخدام العتيدة
(Hi25™ Enterobacteriaceae Identification Kit (KB003، ثم تم إجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية باستخدام طريقة كيربي باور.
المرحلة الثانية:
تم الكشف عن الجينات المسؤولة عن عوامل الفوعة (K99, Sta, eae, Stx1, Stx2) وذلك للكشف عن الأنماط الممرضة للإشريكية القولونية المعزولة من روث العجول المصابة بالإسهال.
المرحلة الثالثة:
تم جمع عينات من البيئة (أرضية الحظائر، المستنقعات، التربة) لعزل عاثيات جراثيم الإشريكية القولونية، إذ تم عزلها باستخدام طريقة صب الآغار المزدوج، كما تم الكشف عن تأثير ظروف الحفظ والإجهاد الفيزيائية والكيميائية على ثباتية عاثيات جراثيم الإشريكية القولونية.
المرحلة الرابعة:
تم استخدام طريقة رقعة الشطرنج للكشف عن التآزر بين عاثيات جراثيم الإشريكية القولونية والمضادات الحيوية (الستربتومايسين، الأوكسي تتراسكلين، النيومايسين) وحساب مؤشر التركيز القاتل الكسري FBIC.
المرحلة الخامسة:
تم إجراء دراسة علاج الإصابة بالإشريكية القولونية المنزفة للأمعاء EHEC داخل الجسم الحي بعاثيات الجراثيم وبالمشاركة بين المضاد الحيوي النيومايسين وعاثيات الجراثيم بالمقارنة مع العلاج بالمعززات الحيوية عند الأرانب، وتم قياس المؤشرات التالية (البروتين التفاعلي-C، السيروبلازمين، الهابتوغلوبين، تعداد EHEC في الروث، تعداد العاثيات في الروث) وبلغت مدة التجربة 15 يوم.
أظهرت نتائج هذه الدراسة الكشف عن 53 عزولة من الإشريكية القولونية وبنسبة 88.33%، كما أظهرت النتائج مقاومة واسعة للمضادات الحيوية حيث بلغت أعلى نسبة مقاومة للمضاد الحيوي بنسلين ج يليه الأموكسيسلين، بينما كانت أعلى نسبة حساسية للمضاد الحيوي سيفتي فيور ويليه السيبروفلوكساسين، وبدراسة فئات المقاومة للمضادات الحيوية تبين أن نسبة جراثيم الإشريكية القولونية ذات المقاومة المتعددة للأدوية MDR بلغت نسبتها 92.45% من العزولات.
وبالكشف عن جينات الفوعة المميزة للذراري الممرضة للإشريكية القولونية تبين انتشار ETEC بنسبة 16.98% و EPEC بنسبة 13.21% و EHEC بنسبة 13.21% وSTEC بنسبة 32.07%، وتم الكشف عن وجود ذراري هجينة للإشريكية القولونية تحمل جينات فوعة تنتمي لأكثر من ذرية بلغت نسبتها 5.66%، في حين أن نسبة 18.87% من جراثيم الإشريكية القولونية المعزولة لم تحمل أي من جينات الفوعة المدروسة.
كما أظهرت النتائج انتشار عاثيات جراثيم الإشريكية القولونية بنسبة 100% في أرضيات الحظائر وبنسبة 75% من المستنقعات وبنسبة 48.33 % في عينات التربة. وبدراسة ثباتية العاثيات تبين ثبات معيار عاثيات الإشريكية القولونية بالتبريد بدرجة حرارة 4 مْ لمدة تصل إلى 6 أشهر في حين أظهرت النتائج ثبات معيار العاثيات عند الحفظ بالتجميد لمدة 3 أشهر وانخفض بشكل معنوي عند 6 أشهر، كما ساعد إضافة الغليسيرول بتركيز 20% على الحفاظ على معيار العاثيات دون انخفاض، وقد أظهر تقييم تعريض العاثيات للإجهاد الحراري بالتسخين ثبات معيارها عند رجة حرارة 45مْ وانخفض بدرجة حرارة 55مْ وتم تعطيل العاثيات بشكل كامل عند درجة حرارة 100مْ لمدة 5 دقائق، كما تفاوت تأثير تعريض عاثيات جراثيم الإشريكية القولونية لأشعة UV لفترات مختلفة حيث انخفضت أعداد عاثيات الإشريكية القولونية بازدياد فترة التعرض وتم تعطيل العاثيات بعد دقيقتين من تعرضها لأشعة UV، كما وأشارت نتائج تقييم حساسية عاثيات الإشريكية القولونية للتغير في قيم pH إلى انخفاض ملحوظ في الظروف الحامضية والقلوية الطرفية وأبدت ثباتاً في درجة الحموضة المتراوحة بين (5 – 8).
كما أظهرت النتائج فعالية العاثيات في خفض التركيز القاتل الأدنى للمضادات الحيوية لكل من الستربتومايسين والأوكسي تتراسكلين والنيومايسين، حيث بلغ التركيز القاتل الأدنى لمزيج المضاد الحيوي الستربتومايسين µg/ml 40 والعاثيات log10 PFU/ml 6، بينما بلغ التركيز القاتل الأدنى للمضاد الحيوي الستربتومايسين منفرداً µg/ml 250، وكذلك بلغ التركيز القاتل الأدنى لمزيج المضاد الحيوي الاوكسي تتراسكلين µg/ml 40 والعاثيات log10 PFU/ml 6، بينما بلغ التركيز القاتل الأدنى للمضاد الحيوي الأوكسي تتراسكلين منفرداً µg/ml 250، وقد بلغ التركيز القاتل الأدنى لمزيج المضاد الحيوي النيومايسين µg/ml 10 والعاثيات log10 PFU/ml 6، بينما بلغ التركيز القاتل الأدنى للمضاد الحيوي النيومايسين منفرداً 200 µg/ml.
أظهرت الدراسة تفوق واضح للعلاج التشاركي بالمضاد الحيوي النيومايسين مع العاثيات داخل الجسم الحي في حيوانات التجارب (الأرانب) في القضاء على عدوى الإشريكية القولونية المنزفة للأمعاء، والحد من الالتهاب الجهازي، ومنع نفوق الحيوانات، مقارنة باستخدام المعززات الحيوية أو باستخدام العاثيات المنفردة . حيث نجح العلاج التآزري (عاثيات + مضاد حيوي) في القضاء التام على الجراثيم من الروث بحلول اليوم العاشر، مع انخفاض أسرع وأكبر في تعداد الجراثيم مقارنة بالعلاج بالعاثيات وحدها أو بالمعززات الحيوية ، كما خفض العلاج التآزري مستويات بروتينات الطور الحاد (CRP, HP, CP) المرتبطة بالالتهاب بشكل أسرع وأكثر فعالية، وعادت إلى مستوياتها الطبيعية في وقت أقصر، مما يشير إلى تحكم أفضل في الالتهاب، كما سجلت المجموعة المعالجة تآزرياً معدل نفوق صفري (0%)، مقارنة بمعدل 37.5% في المجموعة المصابة غير المعالجة، و 16.66% في المجموعات المعالجة بالعاثيات وحدها أو بالمعززات الحيوية. كما أدى إعطاء العاثيات (بمفردها أو مع المضاد الحيوي) إلى زيادة كبيرة ولفترة أطول في تعداد العاثيات في الروث، مما يدل على تكاثرها النشط داخل العائل الجرثومي.
نستنتج من هذه الدراسة إمكانية استخدام عاثيات الجراثيم كعلاج واعد في مكافحة العدوى الجرثومية المقاومة للمضادات الحيوية والاستغناء الكلي أو الجزئي عن المضادات الحيوية.
الكلمات المفتاحية: العاثيات، الإشريكية القولونية، المضادات الحيوية، العجول، الإسهال

تحميل الأطروحة:

اطروحة عاصم الباكير